oncolog-hematolog
ro
Introducere
Tabelul 1
Imunofenotipul clasic al limfoame-
Anticorpii utilizaţi pentru reacţiile imunohistochimice
lor foliculare (LF) este CD20+, CD9a+,
CD10+, CD22+. Ex­amenul imunohisto-
Anticorp Clonă Sursă Diluţie
chimic (IHC) are, în LF, în principal rol
în diagnosticul pozitiv (delimitarea de
CD20 L26 DAKo 1:500
limfoproliferările reactive şi încadrarea
nosologică corectă), dar şi în evaluarea
CD79a HM57 DAKo 1:50
prognostică. Studiul îşi propune eva-
luarea incidenţei unor markeri IHC cu
CD10 56C60 Novocastra 1:75
potenţial prognostic, într-un lot de LF,
bcl2 100/D52 Labvision 1:50
format din 15 cazuri, dintre care 9 LF de
grad 1&2 (3 limfoame foliculare de grad
bcl6 B2602 DAKo 1:20
1-LF1 şi 6 limfoame foliculare de grad
2-LF2) şi 6 limfoame foliculare de grad CD68 KP1 DAKo 1:75
3-LF3 (3 LF3a şi 3 LF3b).
Ki67 tEC-3 DAKo 1:75
Material şi metodă
p53 protein Do-7 DAKo 1:50
Mostre histologice (biopsie ganglio-
nară) provenind de la 15 cazuri de LF,
primar ganglionar (piese înglobate în
blocuri de parafină), aflate în evidenţă teresând minimum 10% din celulele ţiune au fost evaluaţi 3-4 foliculi, 200
şi sub tratament în Clinica Medicală tumorale, „++” colorare moderată cu de celule/folicul la 40 x­ high power field
I Hematologie, diagnosticate în Labo- colorarea între 10 şi 50% din celulele (Hpf), un total de 1.000 de celule/sec-
ratorul de Patologie Tg. Mureş, au tumorale, „+++” colorare intensă peste ţiune. Celulele au fost considerate Ki6+
fost înglobate într-un bloc tip tissue- 50% din celulele tumorale. indiferent de intensitatea reacţiei.
microarray şi evaluate ulterior IHC. Marcarea imunohistochimică, folo- Indicele de proliferare a fost definit ca
Pentru construcţia preparatelor tissue- sind anticorpul anti-Ki6, realizează o numărul de celule pozitive %.
microarray s-au utilizat piese histologice colorare limitată la nucleu. S-a apreciat Pentru CD10 s-a cuantificat coloraţia
încorporate în blocuri de parafină, aflate imunoreactivitatea Ki6, prin urmărirea citoplasmatică sau membranară, iar
în arhivă. Din fiecare bloc s-a preparat celulelor tumorale din ariile uniform co- pentru bcl6 coloraţia nucleară. Intensi-
o lamă care s-a colorat, hematox­ilina- lorate, evitând focarele de necroză şi he- tatea reacţiilor CD10 şi bcl6 s-a apreciat
eosină fiind reevaluată morfologic şi moragie. S-a considerat ca pozitivă orice calitativ, după metoda McCarty şi
utilizată pentru identificarea regiunilor colorare nucleară detectabilă (punc- colab.
[2]
:
tumorale reprezentative. Din ariile mar- tiformă sau difuză). În vederea cuan- n reacţia CD10: „0” - fără celule pozitive,
cate s-au prelevat cilindri tisulari cu tificării, a fost determinat procentul de „+” - celule pozitive rare, coloraţie identi-
diametrul de 0,6 mm, care au fost incluşi celule reactive, considerând negative ca- ficabilă doar la magnificaţie x­ 200, „++” -
ulterior într-un bloc de parafină. Pentru zurile unde ex­presia proteinei Ki6 nu coloraţie identificabilă la ex­aminare low-
a evita heterogenitatea intratumorală, a depăşit % din celule tumorale. S-au power, dar este slabă, „+++” - coloraţie
din fiecare bloc au fost recoltaţi 2-3 notat cu „+” cazurile unde imunomar- identificabilă la ex­aminare low-power,
cilindri. Blocul a fost ulterior secţionat, cajul a atins un procent între  şi 25%, la peste jumătate dintre celule;
feliile fiind transferate pe lame. Tehnicile cu dispoziţie focală. În cazul colorării n reacţia bcl6: „0” - fără celule po-
imunohistochimice au fost ex­ecutate între 25 şi 50% din celule tumorale, s-a zitive, „+” - coloraţie nucleară palidă,
ulterior după metoda uzuală, tehnica considerat ex­presia ca fiind moderată, rare celule cu coloraţie intensă, „++” - co-
standard. „++”. Peste 50% coloraţie intensă, s-a loraţie nucleară variabilă, mai puţin de
Anticorpii utilizaţi au fost: CD20, notat „+++”, iar peste 80% coloraţie jumătate dintre celule cu coloraţie nu-
CD9a, CD10, bcl2, bcl6, p53, Ki6, CD68 intensă, s-a notat „++++”. Indicele de cleară intensă, „+++” - coloraţie nucleară
(tabelul 1). Deoarece LF3 au prezentat, proliferare celulară, evaluat cu ajutorul intensă la peste jumătate dintre celule.
în proporţii variabile, şi zone difuze, reacţiei IHC a Ki6, s-a calculat după Cuantificarea conţinutului intratu-
cilindrii tisulari au fost secţionaţi din metoda propusă de Koster şi colab.
[1]
. moral de macrofage CD68+ s-a efectuat
zonele predominant foliculare. Mai întâi s-a identificat natura celulelor după metoda propusă de Farinha şi
Imunorecţia pentru p53 a fost proliferante, cu dublu marcaj CD20/ colab.
[3]
. La magnificaţie x­ 100 (obiectiv
interpretată ca pozitivă şi specifică doar Ki6 şi CD3/Ki6, pentru a fi vizualizate 10 x­ /0,3 NA) au fost selectate zonele
în cazul colorării omogene. Intensitatea celulele B şi cele T şi a evita notarea cu coloraţie mai intensă. Cuantificarea
colorării a fost evaluată folosind o celulelor T infiltrante, Ki6 pozitive. s-a realizat la Hpf (x­ 1.000 cu imersie),
scară de intensitate cuprinsă între „0” Deoarece numărul celulelor T Ki6 numărând macrofagele CD68+ şi ne-
şi „+++”, iar rezultatele obţinute au pozitive a fost mai mare în regiunile luând în calcul neutrofilele CD68+, de-
fost sistematizate 4 grupe: „-“ colorare interfoliculare, s-au evaluat doar celu- brisul intercelular; au fost evaluate 4-5
absentă, „+” colorare slab pozitivă in- lele intrafoliculare. Pentru fiecare sec- câmpuri reprezentative.
Nr. 6/martie 2009
pag. 3
Page 1  |  Page 2  |  Page 3  |  Page 4  |  Page 5  |  Page 6  |  Page 7  |  Page 8  |  Page 9  |  Page 10  |  Page 11  |  Page 12  |  Page 13  |  Page 14  |  Page 15  |  Page 16  |  Page 17  |  Page 18  |  Page 19  |  Page 20  |  Page 21  |  Page 22  |  Page 23  |  Page 24  |  Page 25  |  Page 26  |  Page 27  |  Page 28  |  Page 29  |  Page 30  |  Page 31  |  Page 32  |  Page 33  |  Page 34  |  Page 35  |  Page 36  |  Page 37  |  Page 38  |  Page 39  |  Page 40  |  Page 41  |  Page 42  |  Page 43  |  Page 44  |  Page 45  |  Page 46  |  Page 47  |  Page 48  |  Page 49  |  Page 50  |  Page 51  |  Page 52  |  Page 53  |  Page 54  |  Page 55  |  Page 56  |  Page 57  |  Page 58  |  Page 59  |  Page 60  |  Page 61  |  Page 62  |  Page 63  |  Page 64  |  Page 65  |  Page 66  |  Page 67  |  Page 68