ANÁLISIS DE PROTEÍNAS DE PIMIENTO
Dr. Luis Alberto Lightbourn Rojas, PhD •
lalr@bioteksa.com E
l pimiento o chile bell (Capsicum annuum L.) perteneciente a las solanáceas, es originario de
América, y es una planta arbustiva anual que posee un tallo frágil y erecto con hojas grandes de forma oblonga. El fruto es una baya de color verde y a medida que madura se vuelve amarillo, naranja o rojo; es dulce, brillante, carnoso y hueco en su interior, y es una buena fuente de vitaminas (A, C y E) y antioxidantes [Fox et al., 2005]. En México, el cultivo de pimiento es uno de los productos hortícolas de mayor importancia por su producción, exportación y consumo humano. En este trabajo se reporta la separación y el análisis de proteínas de peciolos de pimiento por filtración en gel y electroforesis desnaturalizante en una dimensión.
Separación de proteínas La cromatografía de filtración en gel es comúnmente utilizada para describir la separación de proteínas en base a su tamaño molecular en una fase móvil acuosa, y la eliminación de componentes contaminantes como sales, ADN, y virus [Irvine, 2002; Cutler, 2004]. En la separación de proteínas por filtración en gel, aquellas moléculas que son excluidas completamente de la resina eluyen en el volumen vacío (V0), que a menudo es determinado experimentalmente con azul dextrano (2,000 kDa). Las moléculas pequeñas que pueden acceder al poro de la resina, son retenidas más tiempo y por ende, pasan más lento a través de la columna [Cutler, 2004].
Por otro lado, la electroforesis en gel de poliacrilamida
desnaturalizante en una dimensión (SDS-PAGE, por sus siglas en inglés) es un excelente método utilizado para la identificación, el monitoreo del grado de pureza en la purificación, la estimación del peso molecular de proteínas y determinación del número de sus subunidades que las componen [Garfin, 1990].
Resultados
En este trabajo se utilizaron peciolos de plantas de pimiento variedad Cardinal, obtenidas de la Agrícola Paralelo 38 de Culiacán, Sinaloa.
Como resultado del trabajo se obtuvieron proteínas de pimiento extraídas por maceración en un mortero con pistilo, precipitadas con (NH4)2SO4 85 % de saturación, dializadas contra agua destilada, liofilizadas y resuspendidas en amortiguador I.
La cromatografía de filtración en
gel presentó V0 de 125 mL, eluyendo el azul dextrano en la fracción 50; mientras que las proteínas del marcador de peso molecular eluyeron en las fracciones 50, 59, 70,8 4, y 116, respectivamente, para tiroglobulina, gammaglobulina, ovoalbúmina, mioglobina y vitamina B12. En el perfil cromatográfico a
A280nm de las proteínas de pimiento separadas por filtración en gel se observó que las proteínas empezaron a eluir 13 fracciones antes que el azul dextrano (en la fracción 37); sin embargo, en los geles de SDS- PAGE solo se observan bandas a
partir de la fracción 47. La mayor concentración de proteínas se obtuvo en la fracción 85, presentando una A280nm de 0.247 siendo la de mayor cantidad de proteínas.
El análisis de electroforesis se realizó a partir de la fracción 37, y en los geles de SDS-PAGE se presentaron bandas con pesos moleculares entre 75 y 20 kDa. De las fracciones obtenidas, se formaron siete diferentes grupos de fracciones en función de su perfil cromatográfico y electroforético, presentándose las fracciones que componen cada grupo. Estos grupos de fracciones se juntaron, dializaron contra agua destilada y liofilizaron. Las proteínas liofilizadas se resuspendieron en amortiguador I y se separaron en geles de SDS-PAGE, encontrándose el mismo perfil electroforético observado anteriormente, pero con mayor intensidad.
Perspectivas
El presente trabajo constituye una pequeña parte de la investigación que se se desarrolla en el Instituto Lightbourn en colaboración con otras instituciones de educación superior y de investigación, tales como la Universidad de Colima y el Centro de Investigación en Alimentación y Desarrollo, A.C. (CIAD), entre otras, en temas de gran interés como las proteínas de cultivos de importancia para México.
Extracto del trabajo de investigación de Dr. Lightbourn. Consulte los ensayos completos del autor todos los meses en
www.hortalizas.com/in-cerebrum
Dr. Lightbourn es Fundador y Presidente del Instituto de Investigación Lightbourn, A.C.
www.institutolightbourn.edu.mx www.lightbournr.me
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PRODUCTORESdeHORTALIZAS • OCTUBRE 2013
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