Аналітичний контроль «Фармацевтична галузь», № 1 (104), квітень 2025
ше, рекомбінантні реагенти харак- теризувались від серії до серії поміт- но вищою відтворюваністю резуль- татів, ніж лізати амебоцитів. На дум- ку авторів, це достатньо переконли- во демонструє, що рекомбінантні реагенти, зокрема PyroSmart, є дуже надійним інструментом, еквівалент- ним або навіть кращим за природ- ний лізат амебоцитів, і придатним для рутинних випробувань ендо- токсинів на фармацевтичному під- приємстві.
Включено до провідних світових фармакопей Аналіз ендотоксинів із використан- ням рекомбінантних реактивів по- ступово включають до провідних Фармакопей світу. З 1 січня 2021 р.
в Європейській Фармакопеї набра- ла чинності загальна стаття Test for bacterial endotoxins using recombinant factor C» (2.6.32) з по- силанням на флуорометричний ме- тод визначення ендотоксинів із ре- комбінантним фактором С. Того ж року у Фармакопеї Японії було опуб ліковано загальну інформацію щодо використання рекомбінант- них реактивів (rCR) та (rFC) як аль- тернативних тестів (Bacterial Endotoxins Test and Alternative Methods using Recombinant Protein- reagents for Endotoxin Assay <G4-4- 180>), де було зазначено, що ана- ліз ендотоксинів із деякими з ре- комбінантних білкових реагентів виявляє однакову чи кращу чутли- вість і специфічність, ніж у методі з
використанням реактивів лізату. Також як альтернативні розглядає ці методи USP у загальній статті <86> Bacterial endotoxins test using recombinant reagents, яка набуває чинності вже 1 травня 2025 р. У власних експериментальних дослідженнях оцінювали аналітич- ні характеристики (правильність, лінійність, прецизійність, діапазон застосування й межі кількісного визначення) відповідно до вимог загальної статті «Валідація аналі- тичних методик і випробувань» (5.3.N.2., ДФУ 2.4), Керівництва ICH Q2 та USP <1225>. Дослідження проводили з вико- ристанням рекомбінантного реак- тиву PyroSmart NextGen®
і стандарт- ного препарату ендотоксину CSE
Таблиця 2. Параметри регресійного аналізу вмісту бактеріальних ендотоксинів із PyroSmart NextGen® і лізатом амебоцитів
Реактив/тест-набір Вимога PyroSmart NextGen®
Коефіцієнт кореляції ǀrǀ в діапазоні концентрацій ендотоксинів, зазначених виробником, МО/мл
Концентрація доданих ендотоксинів, МО/мл
0,005 0,05 0,5 5
50
Концентрація доданих ендотоксинів, МО/мл
0,005 0,05 0,5 5
50 0,005–50 МО/мл Лізат амебоцитів Limulus Лінійність ǀrǀ =1,00 (max) ǀrǀ = 0,998 (min) 0,005–50 ǀrǀ = 1,00 (max) ǀrǀ = 0,993 (min) 0,005–5 Правильність Кількості виявлених ендотоксинів, (min–max, %)
100,0–120,0 90,0–96,0 90,4–110,6 85,4–97,9 98,8–1000
100,0–120,0 84,0–142,9 108,2–110,2 78,9–87,4 —
Прецизійність—збіжність Коефіцієнт варіації
(min CV—max CV, %)
15,63–24,08 13,41–20,64 6,82–21,22 4,87–8,53 —
2,56
3,73–10,29 3,23–29,23 1,63–6,46 –
Діапазон застосування
Задовільні результати досліджень валідаційних характеристик прецизійність, правильність і лінійність свідчать, що методика забезпечує лінійність, правильність і прецизійність у межах дослідженого діапазону застосування
Межа кількісного визначення 0,005 МО/мл
Правильність: 100,0–120,0% Прецизійність: 15,63–24,08%
Задовільні результати досліджень пре- цизійність і правильність для найнижчої концентрації
CV ≤25%
(0,005 МО/мл) CV ≤20%
(0,05–50 МО/мл) 50–200% ǀrǀ ≥0,980 Критерій прийнятності
www.promoboz.com
ПОВЕРНУТИСЯ ДО ЗМІСТУ
65
Page 1 |
Page 2 |
Page 3 |
Page 4 |
Page 5 |
Page 6 |
Page 7 |
Page 8 |
Page 9 |
Page 10 |
Page 11 |
Page 12 |
Page 13 |
Page 14 |
Page 15 |
Page 16 |
Page 17 |
Page 18 |
Page 19 |
Page 20 |
Page 21 |
Page 22 |
Page 23 |
Page 24 |
Page 25 |
Page 26 |
Page 27 |
Page 28 |
Page 29 |
Page 30 |
Page 31 |
Page 32 |
Page 33 |
Page 34 |
Page 35 |
Page 36 |
Page 37 |
Page 38 |
Page 39 |
Page 40 |
Page 41 |
Page 42 |
Page 43 |
Page 44 |
Page 45 |
Page 46 |
Page 47 |
Page 48 |
Page 49 |
Page 50 |
Page 51 |
Page 52 |
Page 53 |
Page 54 |
Page 55 |
Page 56 |
Page 57 |
Page 58 |
Page 59 |
Page 60 |
Page 61 |
Page 62 |
Page 63 |
Page 64 |
Page 65 |
Page 66 |
Page 67 |
Page 68 |
Page 69 |
Page 70 |
Page 71 |
Page 72 |
Page 73 |
Page 74 |
Page 75 |
Page 76
