Аналітичний контроль «Фармацевтична галузь», № 1 (104), квітень 2025
дає буферні розчини й детергенти, які є додатковим джерелом мінли- вості. Усе це впливає на чутливість отриманого реактиву до бактері- альних ендотоксинів і може стати причиною суттєвих відмінностей у результатах аналізу лікарських за- собів. Тому існує думка, що реком- бінантні білки є більш стабільними, що дозволяє отримувати зіставні результати випробувань. Ще один недолік лізату біоло-
гічного походження — наявність у гемоцитах лізату альтернативно- го механізму активації процесів гелеутворення через глюкан- чутливий фактор G (шлях фактора G). Протягом 10 років лізат амебо- цитів Limulus використовували для контролю фармацевтичної продукції, перш ніж було зроблено приголом шливе відкриття — здат- ність інших матеріалів, а саме
(1,3)-β-D-глюканів, які є компо- нентом клітинних стінок дріжджо- вих та інших грибів, спричиняти хибнопозитивну реакцію, коли бактеріальних ендотоксинів у пре- параті мало або взагалі немає.
Від клонування до комерційного виробництва Ще в минулому сторіччі коагуляцій- на система мечохвостів стала оче- видною, хоча й складною мішенню для зусиль генної інженерії. Вчені Національного університету Сінга- пуру Дінг Джик Лінг (Ding Jeak Ling) і Хо Боу (Ho Bow) усвідомили потен- ціал, який може мати синтезований у лабораторних умовах рекомбі- нантний фактор С для розроблення технології виявлення ендотоксинів без тварин, і вже в 1995 р. клону- вали повнорозмірний фактор С, а в 1997-го — клонували й експресу-
вали рекомбінантний фактор С (rFC) у різних хазяїв. Науковці встанови- ли, що за тих самих умов аналізу rFC має нижчі фонові показники й більш чутливу відповідь на ендотоксин по- рівняно з такими за використання комерційного ЛАЛ- реактиву. Від клонування до комерційного виробництва рекомбінантного реак- тиву почалася нова ера швидкої кількісної діагностики ендотоксинів без участі тварин. Перший комерцій- ний реактив на основі рекомбінант- ного фактора С для мікрофлуороме- тричного аналізу ендотоксинів був запропонований у 2004 р., пізніше з’явилися інші розробки. А у квітні 2021 р. Associates of Cape Cod., Inc. (США) спільно з японською компа- нією Seikagaku Corporation включи- ла до лінійки комерційних пропози- цій рекомбінантний каскадний реак- тив (rCR) PyroSmart NextGen™, кло-
Таблиця 1. Порівняльний аналіз хромогенного кінетичного методу з PyroSmart NextGen® Показник й характеристика Обладнання Довжина хвилі, нм Програмне забезпечення Склад набору Умови зберігання реактивів, °C Три рекомбінантні білки: Склад реагенту
Глюкан-блокувальний буферний розчин Чутливість методу, МО/мл
Мікропланшети
Об’єми, що змішуються, мл Температура реакції, °C Час інкубації, хв
Інтервали зчитування під час інкубації, с
Критерій придатності (коефіцієнт кореляції стандартної кривої)
* — залежно від можливостей планшетного ридера.
• Фактор С • Фактор В • Згортальний фермент
Не застосовується 0,005
0,05 37 ± 1
30–60 30*
≥0,98
60–90 10–30
PyroSmart NextGen™
Інкубаційний мікропланшетний ридер, наприклад BioTek®
ELx808™ 405 нм/490 (492)* і лізатом амебоцитів
Лізат амебоцитів Limulus Ридер для пробірок
або інкубаційний мікропланшетний ридер 405
Дає змогу обробляти дані за часом початку досягнення визначеної оптичної густини або за швидкістю реакції,
наприклад Gen5™, Pyros®
Реагент і буферний розчин для відновлення (PyroSmart NextGen®
Reagent/PyroSmart NextGen® Reconstitution Buffer) 5 ± 3
• Фактор С • Фактор В • Фактор G • Згортальний фермент
Glucashield® 0,001
96-лункові мікропланшети з кришкою, вільні від бактеріальних ендотоксинів і глюканів 0,05/0,1 buffer eXpress Реагент і буферний розчин для відновлення
www.promoboz.com
ПОВЕРНУТИСЯ ДО ЗМІСТУ
63
Page 1 |
Page 2 |
Page 3 |
Page 4 |
Page 5 |
Page 6 |
Page 7 |
Page 8 |
Page 9 |
Page 10 |
Page 11 |
Page 12 |
Page 13 |
Page 14 |
Page 15 |
Page 16 |
Page 17 |
Page 18 |
Page 19 |
Page 20 |
Page 21 |
Page 22 |
Page 23 |
Page 24 |
Page 25 |
Page 26 |
Page 27 |
Page 28 |
Page 29 |
Page 30 |
Page 31 |
Page 32 |
Page 33 |
Page 34 |
Page 35 |
Page 36 |
Page 37 |
Page 38 |
Page 39 |
Page 40 |
Page 41 |
Page 42 |
Page 43 |
Page 44 |
Page 45 |
Page 46 |
Page 47 |
Page 48 |
Page 49 |
Page 50 |
Page 51 |
Page 52 |
Page 53 |
Page 54 |
Page 55 |
Page 56 |
Page 57 |
Page 58 |
Page 59 |
Page 60 |
Page 61 |
Page 62 |
Page 63 |
Page 64 |
Page 65 |
Page 66 |
Page 67 |
Page 68 |
Page 69 |
Page 70 |
Page 71 |
Page 72 |
Page 73 |
Page 74 |
Page 75 |
Page 76
