42 EN PORTADA / APARATO REPRODUCTOR
Revisión de las técnicas de reproducción asistida en perros
El presente artículo recoge las principales técnicas con las que contamos en la actualidad los clínicos para hacer frente a las actuales exigencias de la cría canina de particulares o de profesionales del sector: control del ciclo de la perra, técnicas de manejo del semen e inseminación artificial.
Melania Santana Cruz Dra. Veterinaria. Reproducción Canina GPCert (SAR) European School of Veterinary Postgraduate Studies Centro Veterinario Cania. Las Palmas Imágenes cedidas por la autora
La reproducción asistida tiene sus ini- cios en el siglo XVIII, cuando Spallanzani describe la primera inseminación artificial y nacimiento de tres cachorros en Italia (Fastad, 2000). A partir de ese momento, la tecnología reproductiva comenzó a expe- rimentar un intenso auge, y se realizaron numerosos estudios destinados a determi- nar y mejorar los procesos relacionados con el control de la hembra en celo, la evalua- ción del semen y su conservación mediante refrigeración y congelación seminal, y su posterior aplicación mediante protocolos de inseminación artificial. Y así surgieron los servicios veterinarios especializados en la reproducción de pequeños animales. Al mismo tiempo, el papel del perro en la vida del hombre sigue evolucionando de forma que, si bien aumenta el número de animales de compañía, los canes intervie- nen cada vez más en actividades específi- cas relacionadas con la exposición y belleza canina, la colaboración policial, el apoyo a los discapacitados y como deportistas de
alta élite. Esta última parte requiere la selec- ción de buenos ejemplares y la perpetua- ción de su genética con el fin de conservar sus características, si puede ser sin necesi- dad de la presencia de ambos reproducto- res, de modo que se pueden realizar cruces de grandes ejemplares en la distancia. Asimismo, la alta selección de los ani- males hace que la capacidad reproductiva de los mismos se vea mermada debido a la elevada consanguineidad, por lo que en muchos casos se necesitan estas técnicas de asistencia reproductiva para poder con- seguir una gestación con éxito. En la actualidad no es raro que en la con- sulta veterinaria se nos solicite información por parte de propietarios particulares y de la mano de profesionales del mundo del perro sobre las últimas técnicas de reproducción asistida y con qué cuentan para ello. Sin embargo, el desconocimiento por parte de los clínicos de las técnicas y las posibilida- des existentes en cuanto a la reproducción asistida hace que el asesoramiento en este ámbito muchas veces sea deficiente. El presente artículo intenta hacer un efí-
mero repaso de las mismas con el fin de ayudar al clínico a poner en marcha en consulta prácticas que le ayuden a mejorar sus éxitos reproductivos o, en su defecto, poder asesorar y ofrecer a sus clientes las opciones con las que cuenta de la mano de un compañero especialista en la materia.
Control de la perra para determinar el momento de la monta/inseminación
Figura 1. Citología vaginal a 40X de estro con tinción Diff Quick.
El estudio del ciclo en la hembra canina para determinar el pico exacto de fertilidad es parte fundamental de cualquier proceso de reproducción asistida que se precie. Debemos recordar que ésta solamente es capaz de fecundar 2-3 días del ciclo, si bien ese momento varía mucho entre perras, por lo que sobra indicar que esto se convierte en algo clave para el éxito a la hora de gestar una hembra canina. Las técnicas usadas para ello son:
1 Figura 2. Citología vaginal a 10X de estro con tinción Diagnoestrus RAL. Citología vaginal
La extracción de muestras vaginales mediante hisopo y el estudio de las células tras la tinción con Diff-Quick es la técnica más utilizada en la clínica veterinaria. A través de ella establecemos los porcenta- jes celulares en función de su morfología (células parabasales, intermedias o super- ficiales, entre otras como hematíes, neu- trófilos, etc.) estableciendo en qué fase del ciclo se encuentra la perra, así como des- cartar infecciones a este nivel que pueda alterar la fertilidad de la perra (figura 1). Desde hace unos años se ha puesto en
Figura 3. Kit de tinción diferencial Diagnoestrus RAL. 173
marcha el uso de tinciones diferenciales como la de Harry-Shorr que nos permite teñir las células en función de su acidofi- lia y su basofilia. Este tipo de tinciones, si bien son más largas y algo más caras, nos permiten establecer con mayor precisión los porcentajes celulares en vagina y por tanto, determinar con mayor exactitud si
la perra se encuentra en proestro, estro o diestro, si bien nunca nos permite saber el momento óptimo de fecundación de la perra (figuras 2 y 3).
2 Progesterona Sin duda esta es la técnica estrella en la
reproducción asistida de la hembra repro- ductora. Para la medición de los valores plas- máticos de esta hormona debemos extraer sangre, preferiblemente por las mañanas, y realizar su determinación cuantitativa en plasma o suero en centros laboratoriales. Es importante hacer la conservación y el envío de las muestras en frío (refrigerada o conge- lada) con el fin de evitar su degradación. Los resultados suelen estar disponibles entre 8 y 24 horas después.
Con ello podemos determinar el pico de LH cuando los valores de progesterona son de 1,5-2 ng/ml, el momento justo de ovu- lación cuando se alcanzan los valores en torno a 5-8 ng/ml, situándose en 10-25 ng/ ml en el momento de la fecundación (Lucas X., 2014). Si bien hay muchos protocolos
como tal sucede desde los 2 a los 4 días tras la ovulación, recomendándose mon- tar o inseminar con semen fresco entre los días 1 y 4 tras la misma, si bien si esto se va a realizar con semen refrigerado debe acotarse al periodo comprendido entre el 2º y 4º día posovulación (England y Con- cannon, 2002) (figura 4). Además, la determinación de los nive- les plasmáticos de progesterona nos per- mite establecer de forma más concreta el tiempo de gestación y con ello, mejor exactitud en el control del parto.
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Otras técnicas Otros autores han desarrollado técnicas
para determinar la ovulación en la perra a través del uso del seguimiento ecográfico de los ovarios (Levý y Fontbonne, 2007) y del estudio de los cambios que acontecen en la mucosa vaginal a lo largo del celo (Moxon y England G., 2012). Sin embargo, la falta de exactitud y la complejidad de estas técnicas hacen que se presenten poco prácticas para el clínico veterinario.
La fecundación en la perra sucede desde los 2 a los 4 días tras la ovulación, por lo que se recomienda montar o inseminar con semen fresco entre los días 1 y 4 tras la misma.
para poner este tipo de mediciones en mar- cha, recomiendo comenzar las mediciones de progesterona cuando la perra inicia la fase de estro (más de un 70 % de células superficiales), y repetirla cada dos días hasta el momento de la ovulación. En función de estos resultados se pue-
den programar de forma exacta las mon- tas/inseminaciones, con especial interés cuando debe usarse semen procesado (refrigerado y congelado). De esta forma, teniendo en cuenta el proceso de madu- ración que deben sufrir los óvulos en la hembra canina para alcanzar su capacidad de fecundar (Reynaud y cols., 2005) y la durabilidad (hasta varios días) del semen fresco en el tracto reproductivo de la hem- bra, podemos concretar qué:
La perra es fértil y por tanto, puede que- dar gestante, desde la ovulación hasta 4 días después. Sin embargo, la fecundación
Manejo del semen canino y opciones de criopreservación
La tecnología seminal nos aporta infor- mación sobre cómo hacer un manejo correcto del semen, así como las posibili- dades de conservación del mismo. La extracción del semen por estimula- ción manual (masaje prepucial seguido de exteriorización del pene y contracciones sobre el bulbo del glande) sigue siendo uno de los métodos más sencillos y útiles, ya que permite aislar las tres fracciones del eyaculado, fundamental para realizar inse- minación artificial o crioconservación, ya que tanto la primera fracción y como la ter- cera (procedentes de próstata) son innece- sarias. La utilización de un reclamo sexual como una hembra en celo para incremen- tar la libido y estimulación del perro en la recogida seminal es innecesario en machos
Figura 4. Representación básica de la distribución de los principales “acontecimientos reproductivos” con respecto a los niveles de
progesterona (ng/ml) y los días de evolución del ciclo a partir del pico de LH.
40 35 30 25 20 15 10 5 0
n n n n Pico LH n -4 n -3 -2
n n n -1
0 n 1
Ovulación n
2 n n 3 Días respecto al pico de LH 4
Fecundación 5
6 7 8
Progesterona
t
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