Біофармацевтика «Фармацевтична галузь», № 2 (101), травень 2024
Методи моніторингу бактеріофагової контамінації на біотехнологічних виробництвах
На біотехнологічних виробництвах, де основою технології є культивування бактерій у промислових масштабах, існує проблема контамінації бактеріофагами. Причиною цього може бути безліч факторів, тому встановити джерело контамінації майже неможливо. Одним із заходів убезпечення процесу мікробного біосинтезу від контамінації є регулярний моніторинг наявності вірусу.
М
Я.О. Мельничук, ПрАТ «Індар», Київ
ymelnychuk12@gmail.com
и пропонуємо проводити моніторинг як культураль- ної рідини після закінчен-
М.А. Згатогурська, Відділ молекулярної генетики бактеріофагів Інституту мікробіології і вірусології ім. Д.К. Заболотного НАН України, Київ; Postdoc, Laboratory of structural biology, Central European Institute of Technology, Masaryk University (CEITEC MU), Brno, Czech Republic
ня процесу ферментації, так і при- міщень, оскільки бактеріофагам властиво виживати в несприятли- вих умовах навколишнього сере- довища, а тому існує висока віро- гідність їхнього накопичення на поверхнях у зоні виробництва. Найдоступнішим і найнадійнішим показником фаголізису є біологіч- ний метод, тобто його виділення і повторне зараження носія в лабо- раторії. Для цього ми використову- ємо класичний метод двошарового агару Міллера. Процедура виявлення фага у приміщеннях є близькою до пере- вірки мікробіологічної чистоти, за винятком деяких моментів. Передусім необхідно визначити критичні точки для моніторингу. Для кожного виробництва вони індивідуальні, проте особливу увагу варто звернути на ті місця (дверні ручки, шафи для одягу, панелі управління тощо), з якими часто контактує персонал. За- лежно від циклів виробництва важливо встановити частоту про- ведення змивів. Одним зі значу- щих аспектів якісно проведеного моніторингу є правильно підібра- ні матеріали і обладнання. Змиви доцільно проводити одноразови- ми стерильними свабами, виго- товленими із синтетичного мате- ріалу, а для зберігання фагів ко- ристуватися STM-буфером, до
50 ПОВЕРНУТИСЯ ДО ЗМІСТУ
складу якого входять 200 мМ NaCl, 10 мМ TrisHCl та 10 мМ MgSO4
(рН 7,5). На цьому етапі
варто зауважити, що саме наяв- ність магнію є вирішальною для збереження здатності фагів до адсорбції на поверхні клітини, а склад буфера в цілому забезпе- чує оптимальний рН, іонну силу і стабілізує макромолекулярні структури вірусу. Після відбору проб (змивів і
культуральної рідини) ми оброб- ляли їх хлороформом і освітлю- вали за допомогою низькошвид- кісного центрифугування, щоб позбутися наявних бактерій. Далі супернатанти висівали на бакте- ріальні газони методом «спот- тесту» для первинної оцінки ре- зультатів. Після інкубування про- водили облік результатів: якщо в місцях розкрапування сформу- валися бляшки, то в пробі був наявний біологічно активний фаг, а якщо газон залишився неушко- дженим, то робили висновок про відсутність фага. Проте у випадку відбору змивів характерним є надзвичайно низький титр фагів. Для точнішого та вірогіднішого визначення наявності бактеріо- фагів радимо проводити накопи- чення (збагачення) культури фа- гів. Якщо результат інкубування змиву на бактеріальному газоні свідчить про відсутність бактеріо- фага, тоді рекомендуємо додати до буфера і свабу зі змивом рівну частину культуральної рідини в
www.promoboz.com
Page 1 |
Page 2 |
Page 3 |
Page 4 |
Page 5 |
Page 6 |
Page 7 |
Page 8 |
Page 9 |
Page 10 |
Page 11 |
Page 12 |
Page 13 |
Page 14 |
Page 15 |
Page 16 |
Page 17 |
Page 18 |
Page 19 |
Page 20 |
Page 21 |
Page 22 |
Page 23 |
Page 24 |
Page 25 |
Page 26 |
Page 27 |
Page 28 |
Page 29 |
Page 30 |
Page 31 |
Page 32 |
Page 33 |
Page 34 |
Page 35 |
Page 36 |
Page 37 |
Page 38 |
Page 39 |
Page 40 |
Page 41 |
Page 42 |
Page 43 |
Page 44 |
Page 45 |
Page 46 |
Page 47 |
Page 48 |
Page 49 |
Page 50 |
Page 51 |
Page 52 |
Page 53 |
Page 54 |
Page 55 |
Page 56 |
Page 57 |
Page 58 |
Page 59 |
Page 60 |
Page 61 |
Page 62
