Аналітичний контроль «Фармацевтична галузь», № 4 (103), грудень 2024
Рис. 3
Рис. 4
виконує функцію клапана рецирку- ляції. Колонки з’єднані таким чи- ном, що цільові сполуки, виходячи з першої колонки, потрапляють у другу. Перемикання клапана ре- циркуляції з’єднує вихід другої ко- лонки зі входом першої. Подібно до методу класичної рециркуляції через насос цей цикл перемикання повторюється до досягнення цільової розділь- ної здатності або доки розши- рення піка не перевищить один об’єм колонки. Час перемикання клапана рециркуляції необхідно визначити заздалегідь. Для цьо- го виконують один цикл з однією колонкою, щоб вирахувати час утримування цільових сполук. На відміну від методу рециркуляції через насос детектор перебуває поза контуром рециркуляції, тому роздільну здатність цільо- вої сполуки виявляють після за- вершення розділення. Отже, процес не можна контролювати в режимі онлайн, якщо немає другого детектора. Для фракціо- нування після детектора підклю- чають багатопозиційний клапан або колектор фракцій. Рецирку- ляцію розчинника можна вико- ристовувати в обох методах. Тоді як метод рециркуляції через на- сос працює в замкнутому конту-
48 ПОВЕРНУТИСЯ ДО ЗМІСТУ
рі, метод альтернативного пере- качування потребує наявності клапана фракціонування й поро- гової функції для рециркуляції розчинника. Для порівняння ефективності обох методів ре- циркуляції відомий препаратив- ний метод ВЕРХ (VFD0170 і VFD0171) для розділення ребау- діозиду А та стевіозиду був мас- штабований до напівпрепара- тивного методу.
Підготовка зразків Базовий розчин, що містить 10 мг/мл стевіозиду та 10 мг/мл ребаудіозиду А, готували з вико- ристанням ацетонітрилу/дисти- льованої води у співвідношенні 30:70 (об./об.) як розчинника. Основний розчин розбавляли у співвідношенні 1:50 із розчином 30:70 ацетонітрил/дистильована вода (об./об.) для досягнення ці- льової концентрації 0,2 мг/мл для кожної сполуки. Зразок філь- трували через RC-мембрану на 0,45 мкм (регенерована целюло- за) перед інжекцією.
Результати Результат застосування методу рециркуляції зображено на рис. 3. Оскільки детектор перебу- ває всередині замкнутого конту-
ру, збільшити число циклів можна за одне вимірювання. Збільшен- ня кількості циклів сприяє підви- щенню роздільної здатності піків із відповідним зменшенням висо- ти й збільшенням ширини. Було виконано сім циклів, перш ніж розширення піка стало критич- ним для повторення ще одного циклу. За допомогою альтерна- тивного методу з перемиканням колонок можна побачити, що з кожним наступним циклом роз- дільна здатність також підвищу- валася (рис. 4). Після шести ци- клів було досягнуто максимально можливої роздільної здатності (1,29). Оскільки ширина піка до- сягає об’єму колонки, роздільна здатність не може бути підвище- на. Порівняння роздільної здат- ності показано на рис. 5, де вид- но, що для максимальної розділь- ної здатності 1,13, досягнутої за допомогою рециркуляції, знадо- билося на три цикли менше, ніж у разі перемикання колонок. По- слуговуючись останнім методом, було досягнуто максимальної роздільної здатності 1,29. Як і очікувалося, площі піків для кож- ного циклу залишалися незмінни- ми, тоді як ширина піків збільшу- валася. Жоден зразок не був втрачений під час застосування
www.promoboz.com
Page 1 |
Page 2 |
Page 3 |
Page 4 |
Page 5 |
Page 6 |
Page 7 |
Page 8 |
Page 9 |
Page 10 |
Page 11 |
Page 12 |
Page 13 |
Page 14 |
Page 15 |
Page 16 |
Page 17 |
Page 18 |
Page 19 |
Page 20 |
Page 21 |
Page 22 |
Page 23 |
Page 24 |
Page 25 |
Page 26 |
Page 27 |
Page 28 |
Page 29 |
Page 30 |
Page 31 |
Page 32 |
Page 33 |
Page 34 |
Page 35 |
Page 36 |
Page 37 |
Page 38 |
Page 39 |
Page 40 |
Page 41 |
Page 42 |
Page 43 |
Page 44 |
Page 45 |
Page 46 |
Page 47 |
Page 48 |
Page 49 |
Page 50 |
Page 51 |
Page 52 |
Page 53 |
Page 54 |
Page 55 |
Page 56 |
Page 57 |
Page 58 |
Page 59 |
Page 60
