01 69 92 26 72 Elisa - dosage d’antiBSA
“Détection et dosage d’anticorps sur plaque de micro-titration” Objectifs cognitifs :
Aspects fondamentaux du fonctionnement du système immunitaire : Exemple du SIDA. Technique identique au test du SIDA. Détection et dosage d’anticorps par la technique du test ELISA (micro-titration sur plaque).
Manipulation proposée :
Doser un anticorps de lapin anti-BSA à l’aide d’un support tapissé de BSA et d’un anticorps anti- Immunoglobuline de lapin couplé à la peroxydase. Nous vous fournissons des plaques prêtes à l’emploi. Vous réalisez une gamme étalon de dilution de l’anticorps à doser (anti-BSA) ainsi que quelques témoins notamment un sérum non-immunisé contre la BSA. De plus, chaque binôme pourra doser un sérum immunisé de concentration inconnue en le comparant à la gamme étalon. Chaque binôme dispose d’une barrette de huit puits et réalise le test. À chaque puits correspond une concentration en anticorps à doser ou un témoin. Ensuite un anticorps de détection est déposé dans tous les puits, cet anticorps est dirigé contre les immuno-globulines de lapin et est couplé à la peroxydase. Après lavage, la quantité d’anticorps couplés à la peroxydase fixés sera directement proportionnelle à la concentration de l’anticorps anti-BSA à doser. La révélation se fait en déposant un substrat de la peroxydase (le TMB = Tétra Méthyl Benzidine) qui se colore rapidement en bleu en présence de peroxydase.
Résultats obtenus :
Plus la concentration en anticorps anti-BSA déposée est importante, plus la coloration bleue est intense. Aspect visuel garanti ! Un dosage en colorimétrie peut compléter la manipulation et permettre de tracer une courbe étalon (Absorbance/concentration d’anticorps anti-BSA).
Le protocole le plus proche du programme scolaire
Composition (pour 20 binômes) :
• 20 barrettes de 8 cupules de micro-titration à fond plat ou rond • 2 supports de barrettes • 600 ml de tampon PBS-Tween
• 12 ml de PBS x 10 à diluer pour obtenir 120 ml de PBS • 110 µl de sérum de lapin immunisé contre la BSA • 110 µl de sérum de lapin non-immunisé • 50 µL d’anticorps anti-immunoglobuline de lapin couplé à la peroxydase • 10 ml d’eau stérile
• 8 ml de solution révélatrice de TMB • Notice technique et pédagogique
Matériel nécessaire : Micropipettes 0 à 200 µl (Référence MSR200)
Conservation : 6 mois
Sérums et anticorps au congélateur Le reste au réfrigérateur
Réf. ELISA | 63,00 € TTC Les produits sont proposés au détail p. 215
Activation du complément
“Hémolyse des hématies de mouton” Objectifs cognitifs :
Mettre en évidence le rôle du complément et utiliser ses propriétés pour montrer l’intérêt de l’immunisation. Manipulation proposée
La manipulation proposée consiste à réaliser une hémolyse in vitro.
Composition (pour 20 binômes) : • 5 ml d’hématies de mouton
• 1,5 ml de sérum hémolytique décomplémenté • 150 ml de tampon • Complément lyophilisé
• 80 tubes à hémolyse stériles + bouchons (4 couleurs) • 10 poires stériles calibrées • Notice technique et pédagogique
Conservation :
Les hématies de mouton se conservent 1 semaine ou deux à 4 °C. Indiquer la date de TP est impératif.
Réf. COMP1. | 87,70 € TTC Sédimentation Hémagglutination Sédimentation Hémolyse Les produits sont proposés au détail p. 440 215
GRM + tampon
GRM + anticorps
GRM + complément
GRM + anticorps + complément
Chimie
Sécurité
Équipement
Laboratoire
Médiathèque
MPS
Kits TP
Biologie
Géologie
Observation
Ex.A.O
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